Inhalt
- Bakterielle Agarplatten
- Füllen von Agarplatten
- Lagerung von Agarplatten
- Umkehrung der Agarplatten während der Lagerung
- Umkehrung der Agarplatten während der Inokulation und Inkubation
Agarplatten werden von Wissenschaftlern in der Zell- und Molekularbiologie für Forschungsexperimente verwendet. Es handelt sich dabei um Petrischalen aus Kunststoff, die mit Agar gefüllt sind und Nährstoffe enthalten, die das Wachstum verschiedener Mikroorganismen wie beispielsweise E. coli-Bakterien ermöglichen. In Laboratorien gelten sie als allgemeines Verbrauchsmaterial, da sie schnell und in der Regel intern in großen Chargen verwendet und anschließend gelagert werden.
Bakterielle Agarplatten
Diese Plaques werden im Allgemeinen von wissenschaftlichen Technikern hergestellt, die Agar in Laborqualität in ein bakterielles Kulturmedium wie Luria-Bertani, SOC, Terrific oder Methylenblau-Eosin einbauen. Die Herstellung des Agarkulturmediums wird durch andere Faktoren ergänzt, die für das Überleben der Bakterien erforderlich sein können, oder ein spezifisches Antibiotikum (z. B. Ampicillin oder Kanamycin), um das Wachstum unerwünschter Bakterien zu verhindern.
Füllen von Agarplatten
Agarplatten werden durch einfaches Mischen der Kombination von Nährstoffen und Agar mit einer ausbalancierten pH-Salzlösung hergestellt und erhitzt, bis sie schmelzen. Nachdem es leicht abgekühlt ist, werden wärmeempfindliche Ergänzungen hinzugefügt. Diese Mischung wird noch warm gegossen (und damit verflüssigt) am Boden jeder Petrischale; Es darf auf einer Oberfläche trocknen und sich verfestigen, auf der Bakteriensuspensionen platziert werden können. Nachdem die Platten vollständig abgekühlt sind, werden sie beschriftet und bis zur Verwendung aufbewahrt. Die richtige Lagerung von Agarplatten ist wichtig, um sicherzustellen, dass die richtigen Bakterien kultiviert werden und keine unerwünschten Kontaminationen auftreten, die die experimentellen Ergebnisse beeinträchtigen können.
Lagerung von Agarplatten
Es gibt verschiedene Möglichkeiten, Agarplatten zu lagern, je nachdem, welche Ergänzungen sie enthalten. Wenn leichte Ergänzungen erhältlich sind, werden die Platten im Dunkeln gelagert, in Folie eingewickelt oder in einem lichtdichten Behälter aufbewahrt. Die Platten werden stets in einem Kühlschrank oder Laborkühlschrank bei 4 Grad Celsius aufbewahrt. Durch Kaltlagerung können unerwünschte biologische Verunreinigungen verhindert oder minimiert werden.
Umkehrung der Agarplatten während der Lagerung
Unbenutzte Karten werden während der Lagerung immer umgedreht oder über ihren Deckeln gedreht. Dies geschieht, um ein Verdampfen zu verhindern, wenn die Plaque längere Zeit gelagert wird, was die Wachstumseffizienz der Bakterien beeinflussen oder die Vermehrung unerwünschter Organismen wie Schimmelpilze ermöglichen kann.
Umkehrung der Agarplatten während der Inokulation und Inkubation
Sobald die Plaques mit einer feuchten Suspension von Bakterien gefüllt sind, sollten sie vor der Inkubation über Nacht etwas verdunsten. Es ist jedoch immer noch eine moderate Menge Feuchtigkeit vorhanden. Wenn die Plaque während der Inkubation nicht invertiert wird, können sich die Bakterien nicht richtig an den Agar anheften, was entweder das Wachstum verhindert und Kolonien in geeigneter Weise bildet oder das Wachstum unerwünschter Mikroorganismen fördert. Jedes dieser Ergebnisse macht das Experiment ungültig. Darüber hinaus kann jede Kondensation oder Feuchtigkeit Riefen verursachen, was die Auswahl und Analyse separater Kolonien sehr schwierig macht. Sobald die Bakterien Kolonien bilden, wird die Plaque auch kopfüber gelagert, um den Feuchtigkeitsgehalt aufrechtzuerhalten.